血袋灭菌验证：生物指示剂如何确保灭菌效果达标

在血袋灭菌验证中，生物指示剂通过以下方式确保灭菌效果达标：

1. 选择合适的菌种：针对不同的灭菌方法，选用耐受性大于需灭菌产品中可能污染微生物的菌种。例如，在湿热灭菌法中，最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子，如NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953，其D值为1.5—3.0min，每片（或每瓶）活孢子数5×10⁵—5×10⁶个，在121℃、19min下应被完全杀灭。

2. 确定孢子耐受性：在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的耐受性，并测定孢子的纯度和数量。验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。

3. 科学放置生物指示剂：在灭菌前，将生物指示剂放置在被灭菌物品的内部或代表性位置，确保其能充分暴露于灭菌环境中。例如，在最终灭菌法中，生物指示剂应放在灭菌柜的不同部位，并避免指示剂直接接触到被灭菌物品。

4. 规范培养与观察：灭菌处理后，将生物指示剂取出，放入适宜的培养条件下进行培养。不同的生物指示剂培养条件有所不同，一般细菌芽孢生物指示剂需在37℃或56℃下培养24小时至7天不等。根据指示系统的变化来判断结果，如颜色由紫色变为黄色，通常表示有微生物生长，灭菌失败；若颜色保持不变，则表明灭菌成功。也有些生物指示剂通过荧光等其他方式显示结果。

5. 执行生物指示剂挑战试验：证明所开发的灭菌程序实际达到了程序设计中确定的生物杀灭时间。选择恰当的生物指示剂系统，在过度杀灭程序的确认中，循环结束F₀>12，生物指示剂的D₁₂₁℃应大于1。常采用嗜热脂肪芽孢杆菌等。在采用“残存概率法”设计的灭菌程序的确认中，生物指示剂的耐热性应大于产品的生物负荷的耐热性，且需结合生物负荷历史数据，留有一定的安全系数。

6. 设置对照与评价：生物指示剂挑战试验应作阳性对照，并确认接种部位生物指示剂数量足够，没有其他干扰。对结果进行评价，以确保试验中孢子的对数下降值符合预定的要求，满足产品微生物存活概率PNSU小于10⁻⁶。