细胞冻存时的方法和注意事项有哪些

细胞冻存时的注意事项有哪些

细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。

细胞冻存方法

冻存液最好现配：按1：3：6（或1：2：7） 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理，

对于贴壁细胞

1 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

2胰酶消化

3加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

4离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

5吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存

悬浮细胞：直接离心收集，PBS洗涤

 

细胞冻存的注意事项

 1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液；

 2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；

 3．冻存和复苏用新配制的培养液。